ساخت سازه های پلاسمیدی مناسب جهت بیان اختصاصی بافت و بررسی بیان موقت ژن با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

thesis
abstract

پیشبرها یکی از عناصر کلیدی مهندسی ژنتیک برای بیان هدفمند ژن ها محسوب می شوند.پیشبرهایe8و2a11پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه فرنگی می باشند.e8یک ژن مرتبط با بیوسنتز اتیلن است. پروتیین e8عضوی از خانواده دی اکسیژنازها و مربوط به 1-آمینوسیکلوپروپان 1-کربوکسیلیک اکسیداز است که مرحله آخر مسیر بیوسنتز اتیلن را کاتالیز می کند.ژن 2a11نیز در میوه بیان می شود. mrna،2a11ابتدا در تخمدان و در مرحله شکفتگی کامل گل کشف شد که تا 1 درصد از کل جمعیت mrnaتجمع یافته در طی رسیدگی میوه را تشکیل می دهند.به منظور بیان اختصاصی ژن در غده های سیب زمینی عمومی ترین پیشبر مورد استفاده پیشبرpatatinاست.پاتاتین ها گروهی از گلیکوپروتیین ها هستند که به وسیله یک خانواده چند ژنی رمزسازی می شوند.این پروتیین ها بیش از 40 درصدپروتیین های محلول در غده سیب زمینی را به خود اختصاص می دهند.پیشبرکلاس i بطور عمده مسئول بیان پاتاتین های غده بوده و بنابراین الگوی بیان اختصاصی برای غده را داشته و در بخش بافت پارانشیمی غده به مقدار زیاد وجود دارند.هدف از این تحقیق همسانه سازی پیشبرهای اختصاصی میوه(e8و 2a11) و پیشبر اختصاصی غده(پاتاتین کلاس i یا pat1)، و بررسی بیان اختصاصی آن می باشد.پس از استخراج dnaیژنومی از گیاهان گوجه-فرنگی وسیب زمینی پیشبرهای e8، 2a11و pat1با استفاده از پرایمرهای اختصاصی هر یک از پیشبرها، در ناقل همسانه ساز ptz57r/t همسانه سازی شدند.سپس پلاسمیدهای نوترکیب در باکتری e. coliسویهxl1blue تراریخت گردیدند و سلول هایlacz?غربال شدند.قطعه-های مورد نظر با دو آنزیم برشی hindiiiو bamhiجدا و خالص سازی شدندسپس جایگزین پیشبر دایمی camv35sدر ناقل دوگانه pbi121گردیدند.ناقل دوگانه pbi121با دارا بودن ناحیهt-dna، حاوی ژن گزارش گر گاس وپیشبرcamv35sواجد مشخصات لازم جهت استفاده برای انتقال ژن از طریقاگرواینفیلتریشن به گیاه بود و به همین دلیل به عنوان ناقل هدف جهت کلون سازیپیشبرهایe82a11و pat1و ژنhbsagانتخاب شد.پلاسمیدهای نوترکیب به روش شوک حرارتی بهسویه lba4404agrobacterium tumefaciensمنتقل گردیدند.با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن بیان اختصاصی ژن گاسدر بافت های گیاهان گوجه فرنگی وسیب زمینی مورد بررسی قرار گرفت.نتایج حاصل نشان داد که در مقایسه با پیشبر camv35s، پیشبرهای e8، 2a11و pat1نیز با کارایی بالایی باعث بیان ژن گاس در میوه ها و غده-هامی شوند.پس از تایید پلاسمیدهای نوترکیب، ژن hbsagبا دو آنزیم bamhiو saciاز ناقل pma-t جدا شد و تحت کنترل پیشبر عمومی camv35sو پیشبرهای e8،2a11وpat1جایگزین ژنگاس در ناقل دوگانهpbi121گردید.سپس پلاسمیدهای نوترکیب در سویهxl1blueباکتری e. coliتراریخت شدند.با هضم آنزیمی حضور ژن hbsagتایید شد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

همسانه سازی پیشبر 2A11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

بیان موقت ژن­های بیگانه در بافت­های گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی می­باشد. این روش سریع، انعطاف‌پذیر، ساده و در بافت­های تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2A11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه­فرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2A11 در میوه می­شود. هدف از این تحقیق همسانه­سازی پیشبر 2A11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجه­فرنگی، پیشبر 2A11 با استفا...

full text

همسانه سازی پیشبر 2A11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

بیان موقت ژن­های بیگانه در بافت­های گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی می­باشد. این روش سریع، انعطاف‌پذیر، ساده و در بافت­های تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2A11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه­فرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2A11 در میوه می­شود. هدف از این تحقیق همسانه­سازی پیشبر 2A11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجه­فرنگی، پیشبر 2A11 با استفا...

full text

همسانه سازی و بررسی بیان موقت پیشبر pat1 گیاه سیب زمینی با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

  To achieve the high level of gene expression, promoters are key elements. Patatin promoter has been used as a specific gene expression in potato tubers. Patatin is a group of glycol protein in potato tuber which is code by a multiple family genes. This protein makes up more than 40% of soluble proteins of potato tubers. Class I Promoters mainly responsible for tuber -specific expression patte...

full text

همسانه سازی پیشبر 2a11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

بیان موقت ژن­های بیگانه در بافت­های گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی می­باشد. این روش سریع، انعطاف پذیر، ساده و در بافت­های تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2a11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه­فرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2a11 در میوه می­شود. هدف از این تحقیق همسانه­سازی پیشبر 2a11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج dna ژنومی از گیاه گوجه­فرنگی، پیشبر 2a11 با استفا...

full text

همسانه سازی پیشبر ۲a۱۱ گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

بیان موقت ژن­های بیگانه در بافت­های گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی می­باشد. این روش سریع، انعطاف پذیر، ساده و در بافت­های تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2a11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه­فرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2a11 در میوه می­شود. هدف از این تحقیق همسانه­سازی پیشبر 2a11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج dna ژنومی از گیاه گوجه­فرنگی، پیشبر 2a11 با استفا...

full text

مهار موقت بیان ژن vegfr۲ با استفاده از sirna اختصاصی در محیط کشت

مقدمه: استفاده از sirna برای خاموش سازی بیان ژن ها امروزه در حال گسترش است. از جمله اهداف این تکنولوژی؛ جلوگیری از بیان عامل رشد اندوتلیال عروقی است. مطالعه حاضر به منظور جلوگیری بیان گیرنده تیپ ii این عامل ( vegfr-2: vascular endothelial growth factor receptor ii ) با استفاده از sirna ی اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است. مواد و روش ها: ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی های sirna ی اختصا...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری - دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی

Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023